納豆激酶粉

【產品名稱】：納豆激酶

【 別 名 】：納豆激酶;納豆紅麴;納豆激酶生產廠家;納豆激酶作用;食品級納豆激酶價格;食品級納豆激酶生產廠家;納豆激酶廠家;納豆激酶原粉

【英文名稱】：Nattokinase;Nattoesse Haruno-Ogawa;4-(carboxymethyl)-2-[(1R)-1-[[2-[(2,5-dichlorobenzoyl)amino]acetyl]amino]-3-methylbutyl]-6-oxo-1,3,2-dioxaborinane-4-carboxylic acid;4-(Carboxymethyl)-2-[(1R)-1-{[N-(2,5-dichlorobenzoyl)glycyl]amino}-3-methylbutyl]-6-oxo-1,3,2-dioxaborinane-4-carboxylic acid

【 來  源 】：源自中國的咸豆豉，在日本得到發展，由黃豆通過納豆菌（枯草桿菌）發酵製成豆制品。具有黏性，氣味較臭，味道較甜，不僅保有黃豆的營養價值、富含維生素K2、提高蛋白質的消化吸收率，更重要的是發酵過程產生了多種生理活性物質。納豆發酵過程中由納豆枯草桿菌(Bacillus subtilisl natto)產生的一種絲氨酸蛋白酶。

【結構類型】：單鏈多肽，碱性蛋白酶
【納豆激酶的穩定性】：
1.pH穩定性
在自然pH值狀態下，相對比較穩定，在pH值從7升至12時，室溫下10min內穩定；pH值低於5時，則極為不穩定，很快失去活性；當溫度超過60時則迅速因蛋白變性而失活。反復凍融五個循環時，其活性仍保存95%以上，從而表明凍融對納豆激酶的活性無較大影響。當納豆激酶與煮沸的小麥提取液、煮沸的肉湯以及血清蛋白和胃粘液蛋白混合后，納豆激酶的穩定有明顯增加，甚至在酸性pH值時，酶活性也並不完全失掉。
2.熱穩定性
在溫度低於45°C時活性相對穩定，高于60°C則因蛋白質變性而迅速失活，凍融對納豆激酶的活性無較大影響，反復凍融5次后，該酶仍能保持95%以上的活性。
3.金屬離子穩定性
納豆激酶的活性還受一些金屬離子的影響，Hg2+會使其完全失活，Cu2+、Zn2+、Al3+、Ca2+等離子對該酶有不同的抑製作用，而Mg2+、Co2+則對其有激活作用。
4.其他物質穩定性
E-ACA和EDTA對納豆激酶活性無明顯影響，而PMSF能完全抑制其活性。1mmol/L的DFP和neguvon則能完全抑制納豆激酶的活性。
【納豆激酶分子量】：
納豆激酶是一種單鏈多肽酶，由於測定分子量的技術方法不同，因此所測得到的分子量也有明顯不同。用SephadexG100柱凝膠過濾法，得到的結果為20000，用園二色方法測定為27300。根據氨基酸順序計算出該酶的準確分子量為27.728。
【納豆激酶PI值（等電點）】：
用Svunsson的柱型電泳法，等電聚焦測定納豆激酶具有對稱的單一的纖溶酶峰，其PI值為8.6±0.3。等電點可以提供在分離提純納豆激酶時，考慮調pH值在PI值附近，有利於酶的純化。
【納豆激酶的底物特異性】：

NK作為絲氨酸蛋白酶，其酰胺水解活性可通過許多合成底物進行觀察。對納豆激酶最敏感的底物為血漿纖溶酶的底物，即S2251；對底物H2DLArgPNA，S2238，S2266和S2302具有一定的活性，而對S2444和S2484則明顯地無活性。納豆激酶有其特異的水解蛋白的氨基酸作用和識別位點。

【存儲條件】：避光儲存於密封容器中

【產品規格】：

納豆激酶(nattokinase，簡稱NK)是一種枯草桿菌蛋白激酶，是在納豆發酵過程中由納豆枯草桿菌(Bacillus subtilisl natto)產生的一種絲氨酸蛋白酶（單鏈多肽酶）。

含量為：5000Fu/g、12000Fu/g、20000Fu/g。

納豆激酶 Fu與Fu/g的區別？ 

• .納豆激酶在國際上的標準單位為“Fu”(fibrin degradation unit)，是指每粒納豆激酶產品的納豆激酶含量； 
• .“Fu/g”是指每克納豆原料中的納豆激酶含量.

【檢測方法】：

• 儀器與試劑（吸光值日本法）
  • 分光光度計。
  • 高速離心機。
  • 水浴鍋
  • Vortex Mixer。
  • 漏斗（直徑8cm）ⅹ1、50m定量瓶ⅹ2、濾紙、50ml離心管ⅹ40、Pipet（5ml、1ml、0.2ml、0.02ml）、ependoffⅹ16、500mlⅹ6、培養皿ⅹ9、游標卡尺、Timer droper 1ml。
• 藥品（吸光值法所需藥品）：
  • TCA WAKO 204-02405 試藥特技 99%。
  • CaSO4•2H2O Riedel dehaen 31221 99%。
  • NaCl WAKO 191-01665 99%。
  • Sodium Acetate（CH3COONa•3H2O）Amresco 99%。
  • CH3COOH。
  • Triton X-100 SIGMA NO.T-68/8。
  • Sodium Borate•10H2O 日本試藥工業 extra pure 99%。
  • NaCl WAKO。
  • Fibrinogen Sigma F-8630（From Bovine plasma）。
  • Thrombin Sigma F-4648（From Bovine plasma）。
  • NaOH。
• 溶液制備
  • Borate buffer 0.05M（PH 8.5）

Sodium Borate•1010H2O 9.54g + NaCl 4.5g而後加入二次蒸餾水450ml，以HCl（6M）調整PH至8.5， 使總體積為500ml。

• TCA Solution

TCA 16.34g + 二次蒸餾水至500ml。

• Dilution buffer

CaSO4•2H2O 0.177g。

NaCl 0.292g。

1M Sodium acetic buffer 1ml。

10% Triton x - 100 0.25ml。

二次蒸餾水加至 500ml。

• Triton x - 100

5.0g + 二次蒸餾水 45ml。

• 1M acetate buffer （PH 6.0）.

Sodium acetate 12.96g + 二次蒸餾水 50ml 並以 1M醋酸調整 PH至6.0而後加入二次蒸餾水使總體積達100ml。

• Fibrinogen solution -2.

Fibrinogen 0.144g + Borate buffer 20ml 均勻攪拌使其完全

溶解（30分鐘后）以濾紙過濾得到濾液既是。

• Thrombin solution -1

將5000IU Thrombin溶于10ml 0.85% NaCl solution，Thrombin solution -1 濃度為500IU/ml。（需保存於-80℃）。

• Thrombin solution -2

Thrombin solution -1 + 4.5ml 0.85% NaCl solution。

• Thrombin solution -3

Thrombin solution -1 200微升 + Borate buffer 4.8ml。

• 0.85% NaCl solution

0.85（g）NaCl + 100（ml）二次蒸餾水。

• 吸光值法需要配製藥品1、2、3、4、5、7、10
• 測定方法
  • 準備12支試管，為測量二個樣品，準備實驗組及空白組（樣品*3，空白*3）。
  • 于試管中加入0.8ml Fibrinogen 及2.8ml Borate Buffer（0.05mol/L pH8.5），12支試管依序每隔20秒至於37℃水浴。
  • 五分鐘時，每隔20秒加入Thrombin solution -3 0.2ml，並震盪10秒鐘，實驗組與空白組都要加。
  • 15分鐘時，每隔20秒實驗組加入nattokinase 0.2ml，震盪十秒鐘，而對照組在17分鐘時每隔20秒加入5ml TCA，並震盪10秒鐘，19分鐘時，每隔20秒加入nattokinase 0.2ml並震盪10秒鐘。
  • 35分鐘時，實驗組及空白組每隔20秒震盪10秒鐘。
  • 39分鐘時，空白組至37℃水浴移行出來，吸取沒管2.0ml到離心管，離心12000rpm 10分鐘，測OD 275nm.（rAs）。
  • 55分鐘時，實驗組及空白組每隔20秒，震盪10秒鐘。
  • 75分鐘時，實驗組每隔20秒加入4.0ml TCA，震盪10秒鐘。
  • 95分鐘時，將實驗組從37℃水浴中移行出來，吸取每管2.0ml到離心管，離心12000rpm 10分鐘，測OD275 nm.（rAb）。
• 計算方式：

1單位活性（1FU），在本測試方法中，每分鐘始OD 275 吸光值增加0.01的酵素量。

納豆激酶酵素活性（FU/g）= （rAs - rAb）/0.01/0.1/60 *D

rAs：待測液之吸光值

rAb：空白組之吸光值

D：樣品稀釋倍數