納豆激酶粉
產品描述
【產品名稱】：納豆激酶
【 別 名 】：納豆激酶;納豆紅麴;納豆激酶生產廠家;納豆激酶作用;食品級納豆激酶價格;食品級納豆激酶生產廠家;納豆激酶廠家;納豆激酶原粉
【英文名稱】：Nattokinase;Nattoesse Haruno-Ogawa;4-(carboxymethyl)-2-[(1R)-1-[[2-[(2,5-dichlorobenzoyl)amino]acetyl]amino]-3-methylbutyl]-6-oxo-1,3,2-dioxaborinane-4-carboxylic acid;4-(Carboxymethyl)-2-[(1R)-1-{[N-(2,5-dichlorobenzoyl)glycyl]amino}-3-methylbutyl]-6-oxo-1,3,2-dioxaborinane-4-carboxylic acid
【 來 源 】：源自中國的咸豆豉，在日本得到發展，由黃豆通過納豆菌（枯草桿菌）發酵製成豆制品。具有黏性，氣味較臭，味道較甜，不僅保有黃豆的營養價值、富含維生素K2、提高蛋白質的消化吸收率，更重要的是發酵過程產生了多種生理活性物質。納豆發酵過程中由納豆枯草桿菌(Bacillus subtilisl natto)產生的一種絲氨酸蛋白酶。
【結構類型】：單鏈多肽，碱性蛋白酶
【納豆激酶的穩定性】：
1.pH穩定性
在自然pH值狀態下，相對比較穩定，在pH值從7升至12時，室溫下10min內穩定；pH值低於5時，則極為不穩定，很快失去活性；當溫度超過60時則迅速因蛋白變性而失活。反復凍融五個循環時，其活性仍保存95%以上，從而表明凍融對納豆激酶的活性無較大影響。當納豆激酶與煮沸的小麥提取液、煮沸的肉湯以及血清蛋白和胃粘液蛋白混合后，納豆激酶的穩定有明顯增加，甚至在酸性pH值時，酶活性也並不完全失掉。
2.熱穩定性
在溫度低於45°C時活性相對穩定，高于60°C則因蛋白質變性而迅速失活，凍融對納豆激酶的活性無較大影響，反復凍融5次后，該酶仍能保持95%以上的活性。
3.金屬離子穩定性
納豆激酶的活性還受一些金屬離子的影響，Hg2+會使其完全失活，Cu2+、Zn2+、Al3+、Ca2+等離子對該酶有不同的抑製作用，而Mg2+、Co2+則對其有激活作用。
4.其他物質穩定性
E-ACA和EDTA對納豆激酶活性無明顯影響，而PMSF能完全抑制其活性。1mmol/L的DFP和neguvon則能完全抑制納豆激酶的活性。
【納豆激酶分子量】：
納豆激酶是一種單鏈多肽酶，由於測定分子量的技術方法不同，因此所測得到的分子量也有明顯不同。用SephadexG100柱凝膠過濾法，得到的結果為20000，用園二色方法測定為27300。根據氨基酸順序計算出該酶的準確分子量為27.728。
【納豆激酶PI值（等電點）】：
用Svunsson的柱型電泳法，等電聚焦測定納豆激酶具有對稱的單一的纖溶酶峰，其PI值為8.6±0.3。等電點可以提供在分離提純納豆激酶時，考慮調pH值在PI值附近，有利於酶的純化。
【納豆激酶的底物特異性】：
NK作為絲氨酸蛋白酶，其酰胺水解活性可通過許多合成底物進行觀察。對納豆激酶最敏感的底物為血漿纖溶酶的底物，即S2251；對底物H2DLArgPNA，S2238，S2266和S2302具有一定的活性，而對S2444和S2484則明顯地無活性。納豆激酶有其特異的水解蛋白的氨基酸作用和識別位點。
【存儲條件】：避光儲存於密封容器中
【產品規格】：
納豆激酶(nattokinase，簡稱NK)是一種枯草桿菌蛋白激酶，是在納豆發酵過程中由納豆枯草桿菌(Bacillus subtilisl natto)產生的一種絲氨酸蛋白酶（單鏈多肽酶）。
含量為：5000Fu/g、12000Fu/g、20000Fu/g。
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納豆激酶規格單 |
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項目 |
標準 |
方法 |
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納豆激酶 FU/g |
20000 |
見下檢測方法 |
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色澤 |
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類白色至淺黃色 |
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外觀 |
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均勻、無可見異物的精細粉末 |
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乾燥失重 % |
≤8.0 |
CNS5033 |
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重金屬（以鉛（Pb）計） mg/kg |
＜10 |
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總生菌數 cfu/g |
＜1000 |
CNS10890 |
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黴菌及酵母菌 cfu/g |
＜100 |
CNS12925 |
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大腸桿菌 |
不得檢出 |
CNS10951 |
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沙門菌 |
不得檢出 |
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金黃色葡萄球菌 |
不得檢出 |
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納豆激酶 Fu與Fu/g的區別？
- .納豆激酶在國際上的標準單位為“Fu”(fibrin degradation unit)，是指每粒納豆激酶產品的納豆激酶含量；
- .“Fu/g”是指每克納豆原料中的納豆激酶含量.
【檢測方法】：
- 儀器與試劑（吸光值日本法）
- 分光光度計。
- 高速離心機。
- 水浴鍋
- Vortex Mixer。
- 漏斗（直徑8cm）ⅹ1、50m定量瓶ⅹ2、濾紙、50ml離心管ⅹ40、Pipet（5ml、1ml、0.2ml、0.02ml）、ependoffⅹ16、500mlⅹ6、培養皿ⅹ9、游標卡尺、Timer droper 1ml。
- 藥品（吸光值法所需藥品）：
- TCA WAKO 204-02405 試藥特技 99%。
- CaSO4•2H2O Riedel dehaen 31221 99%。
- NaCl WAKO 191-01665 99%。
- Sodium Acetate（CH3COONa•3H2O）Amresco 99%。
- CH3COOH。
- Triton X-100 SIGMA NO.T-68/8。
- Sodium Borate•10H2O 日本試藥工業 extra pure 99%。
- NaCl WAKO。
- Fibrinogen Sigma F-8630（From Bovine plasma）。
- Thrombin Sigma F-4648（From Bovine plasma）。
- NaOH。
- 溶液制備
- Borate buffer 0.05M（PH 8.5）
Sodium Borate•1010H2O 9.54g + NaCl 4.5g而後加入二次蒸餾水450ml，以HCl（6M）調整PH至8.5， 使總體積為500ml。
- TCA Solution
TCA 16.34g + 二次蒸餾水至500ml。
- Dilution buffer
CaSO4•2H2O 0.177g。
NaCl 0.292g。
1M Sodium acetic buffer 1ml。
10% Triton x - 100 0.25ml。
二次蒸餾水加至 500ml。
- Triton x - 100
5.0g + 二次蒸餾水 45ml。
- 1M acetate buffer （PH 6.0）.
Sodium acetate 12.96g + 二次蒸餾水 50ml 並以 1M醋酸調整 PH至6.0而後加入二次蒸餾水使總體積達100ml。
- Fibrinogen solution -2.
Fibrinogen 0.144g + Borate buffer 20ml 均勻攪拌使其完全
溶解（30分鐘后）以濾紙過濾得到濾液既是。
- Thrombin solution -1
將5000IU Thrombin溶于10ml 0.85% NaCl solution，Thrombin solution -1 濃度為500IU/ml。（需保存於-80℃）。
- Thrombin solution -2
Thrombin solution -1 + 4.5ml 0.85% NaCl solution。
- Thrombin solution -3
Thrombin solution -1 200微升 + Borate buffer 4.8ml。
- 0.85% NaCl solution
0.85（g）NaCl + 100（ml）二次蒸餾水。
- 吸光值法需要配製藥品1、2、3、4、5、7、10
- 測定方法
- 準備12支試管，為測量二個樣品，準備實驗組及空白組（樣品*3，空白*3）。
- 于試管中加入0.8ml Fibrinogen 及2.8ml Borate Buffer（0.05mol/L pH8.5），12支試管依序每隔20秒至於37℃水浴。
- 五分鐘時，每隔20秒加入Thrombin solution -3 0.2ml，並震盪10秒鐘，實驗組與空白組都要加。
- 15分鐘時，每隔20秒實驗組加入nattokinase 0.2ml，震盪十秒鐘，而對照組在17分鐘時每隔20秒加入5ml TCA，並震盪10秒鐘，19分鐘時，每隔20秒加入nattokinase 0.2ml並震盪10秒鐘。
- 35分鐘時，實驗組及空白組每隔20秒震盪10秒鐘。
- 39分鐘時，空白組至37℃水浴移行出來，吸取沒管2.0ml到離心管，離心12000rpm 10分鐘，測OD 275nm.（rAs）。
- 55分鐘時，實驗組及空白組每隔20秒，震盪10秒鐘。
- 75分鐘時，實驗組每隔20秒加入4.0ml TCA，震盪10秒鐘。
- 95分鐘時，將實驗組從37℃水浴中移行出來，吸取每管2.0ml到離心管，離心12000rpm 10分鐘，測OD275 nm.（rAb）。
- 計算方式：
1單位活性（1FU），在本測試方法中，每分鐘始OD 275 吸光值增加0.01的酵素量。
納豆激酶酵素活性（FU/g）= （rAs - rAb）/0.01/0.1/60 *D
rAs：待測液之吸光值
rAb：空白組之吸光值
D：樣品稀釋倍數