纳豆激酶粉
产品描述
【产品名称】：纳豆激酶
【 别 名 】：纳豆激酶;纳豆红麴;纳豆激酶生产厂家;纳豆激酶作用;食品级纳豆激酶价格;食品级纳豆激酶生产厂家;纳豆激酶厂家;纳豆激酶原粉
【英文名称】：Nattokinase;Nattoesse Haruno-Ogawa;4-(carboxymethyl)-2-[(1R)-1-[[2-[(2,5-dichlorobenzoyl)amino]acetyl]amino]-3-methylbutyl]-6-oxo-1,3,2-dioxaborinane-4-carboxylic acid;4-(Carboxymethyl)-2-[(1R)-1-{[N-(2,5-dichlorobenzoyl)glycyl]amino}-3-methylbutyl]-6-oxo-1,3,2-dioxaborinane-4-carboxylic acid
【 来 源 】：源自中国的咸豆豉，在日本得到发展，由黄豆通过纳豆菌（枯草杆菌）发酵制成豆制品。具有黏性，气味较臭，味道较甜，不仅保有黄豆的营养价值、富含维生素K2、提高蛋白质的消化吸收率，更重要的是发酵过程产生了多种生理活性物质。纳豆发酵过程中由纳豆枯草杆菌(Bacillus subtilisl natto)产生的一种丝氨酸蛋白酶。
【结构类型】：单链多肽，碱性蛋白酶
【纳豆激酶的稳定性】：
1.pH稳定性
在自然pH值状态下，相对比较稳定，在pH值从7升至12时，室温下10min内稳定；pH值低于5时，则极为不稳定，很快失去活性；当温度超过60时则迅速因蛋白变性而失活。反复冻融五个循环时，其活性仍保存95%以上，从而表明冻融对纳豆激酶的活性无较大影响。当纳豆激酶与煮沸的小麦提取液、煮沸的肉汤以及血清蛋白和胃粘液蛋白混合后，纳豆激酶的稳定有明显增加，甚至在酸性pH值时，酶活性也并不完全失掉。
2.热稳定性
在温度低于45°C时活性相对稳定，高于60°C则因蛋白质变性而迅速失活，冻融对纳豆激酶的活性无较大影响，反复冻融5次后，该酶仍能保持95%以上的活性。
3.金属离子稳定性
纳豆激酶的活性还受一些金属离子的影响，Hg2+会使其完全失活，Cu2+、Zn2+、Al3+、Ca2+等离子对该酶有不同的抑制作用，而Mg2+、Co2+则对其有激活作用。
4.其他物质稳定性
E-ACA和EDTA对纳豆激酶活性无明显影响，而PMSF能完全抑制其活性。1mmol/L的DFP和neguvon则能完全抑制纳豆激酶的活性。
【纳豆激酶分子量】：
纳豆激酶是一种单链多肽酶，由于测定分子量的技术方法不同，因此所测得到的分子量也有明显不同。用SephadexG100柱凝胶过滤法，得到的结果为20000，用园二色方法测定为27300。根据氨基酸顺序计算出该酶的准确分子量为27.728。
【纳豆激酶PI值（等电点）】：
用Svunsson的柱型电泳法，等电聚焦测定纳豆激酶具有对称的单一的纤溶酶峰，其PI值为8.6±0.3。等电点可以提供在分离提纯纳豆激酶时，考虑调pH值在PI值附近，有利于酶的纯化。
【纳豆激酶的底物特异性】：
NK作为丝氨酸蛋白酶，其酰胺水解活性可通过许多合成底物进行观察。对纳豆激酶最敏感的底物为血浆纤溶酶的底物，即S2251；对底物H2DLArgPNA，S2238，S2266和S2302具有一定的活性，而对S2444和S2484则明显地无活性。纳豆激酶有其特异的水解蛋白的氨基酸作用和识别位点。
【存储条件】：避光储存于密封容器中
【产品规格】：
纳豆激酶(nattokinase，简称NK)是一种枯草杆菌蛋白激酶，是在纳豆发酵过程中由纳豆枯草杆菌(Bacillus subtilisl natto)产生的一种丝氨酸蛋白酶（单链多肽酶）。
含量为：5000Fu/g、12000Fu/g、20000Fu/g。
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纳豆激酶规格单 |
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项目 |
标准 |
方法 |
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纳豆激酶 FU/g |
20000 |
见下检测方法 |
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色泽 |
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类白色至浅黄色 |
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外观 |
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均匀、无可见异物的精细粉末 |
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干燥失重 % |
≤8.0 |
CNS5033 |
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重金属（以铅（Pb）计） mg/kg |
＜10 |
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总生菌数 cfu/g |
＜1000 |
CNS10890 |
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霉菌及酵母菌 cfu/g |
＜100 |
CNS12925 |
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大肠杆菌 |
不得检出 |
CNS10951 |
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沙门菌 |
不得检出 |
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金黄色葡萄球菌 |
不得检出 |
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纳豆激酶 Fu与Fu/g的区别？
- .纳豆激酶在国际上的标准单位为“Fu”(fibrin degradation unit)，是指每粒纳豆激酶产品的纳豆激酶含量；
- .“Fu/g”是指每克纳豆原料中的纳豆激酶含量.
【检测方法】：
- 仪器与试剂（吸光值日本法）
- 分光光度计。
- 高速离心机。
- 水浴锅
- Vortex Mixer。
- 漏斗（直径8cm）ⅹ1、50m定量瓶ⅹ2、滤纸、50ml离心管ⅹ40、Pipet（5ml、1ml、0.2ml、0.02ml）、ependoffⅹ16、500mlⅹ6、培养皿ⅹ9、游标卡尺、Timer droper 1ml。
- 药品（吸光值法所需药品）：
- TCA WAKO 204-02405 试药特技 99%。
- CaSO4•2H2O Riedel dehaen 31221 99%。
- NaCl WAKO 191-01665 99%。
- Sodium Acetate（CH3COONa•3H2O）Amresco 99%。
- CH3COOH。
- Triton X-100 SIGMA NO.T-68/8。
- Sodium Borate•10H2O 日本试药工业 extra pure 99%。
- NaCl WAKO。
- Fibrinogen Sigma F-8630（From Bovine plasma）。
- Thrombin Sigma F-4648（From Bovine plasma）。
- NaOH。
- 溶液制备
- Borate buffer 0.05M（PH 8.5）
Sodium Borate•1010H2O 9.54g + NaCl 4.5g而后加入二次蒸馏水450ml，以HCl（6M）调整PH至8.5， 使总体积为500ml。
- TCA Solution
TCA 16.34g + 二次蒸馏水至500ml。
- Dilution buffer
CaSO4•2H2O 0.177g。
NaCl 0.292g。
1M Sodium acetic buffer 1ml。
10% Triton x - 100 0.25ml。
二次蒸馏水加至 500ml。
- Triton x - 100
5.0g + 二次蒸馏水 45ml。
- 1M acetate buffer （PH 6.0）.
Sodium acetate 12.96g + 二次蒸馏水 50ml 并以 1M醋酸调整 PH至6.0而后加入二次蒸馏水使总体积达100ml。
- Fibrinogen solution -2.
Fibrinogen 0.144g + Borate buffer 20ml 均匀搅拌使其完全
溶解（30分钟后）以滤纸过滤得到滤液既是。
- Thrombin solution -1
将5000IU Thrombin溶于10ml 0.85% NaCl solution，Thrombin solution -1 浓度为500IU/ml。（需保存于-80℃）。
- Thrombin solution -2
Thrombin solution -1 + 4.5ml 0.85% NaCl solution。
- Thrombin solution -3
Thrombin solution -1 200微升 + Borate buffer 4.8ml。
- 0.85% NaCl solution
0.85（g）NaCl + 100（ml）二次蒸馏水。
- 吸光值法需要配制药品1、2、3、4、5、7、10
- 测定方法
- 准备12支试管，为测量二个样品，准备实验组及空白组（样品*3，空白*3）。
- 于试管中加入0.8ml Fibrinogen 及2.8ml Borate Buffer（0.05mol/L pH8.5），12支试管依序每隔20秒至于37℃水浴。
- 五分钟时，每隔20秒加入Thrombin solution -3 0.2ml，并震荡10秒钟，实验组与空白组都要加。
- 15分钟时，每隔20秒实验组加入nattokinase 0.2ml，震荡十秒钟，而对照组在17分钟时每隔20秒加入5ml TCA，并震荡10秒钟，19分钟时，每隔20秒加入nattokinase 0.2ml并震荡10秒钟。
- 35分钟时，实验组及空白组每隔20秒震荡10秒钟。
- 39分钟时，空白组至37℃水浴移行出来，吸取没管2.0ml到离心管，离心12000rpm 10分钟，测OD 275nm.（rAs）。
- 55分钟时，实验组及空白组每隔20秒，震荡10秒钟。
- 75分钟时，实验组每隔20秒加入4.0ml TCA，震荡10秒钟。
- 95分钟时，将实验组从37℃水浴中移行出来，吸取每管2.0ml到离心管，离心12000rpm 10分钟，测OD275 nm.（rAb）。
- 计算方式：
1单位活性（1FU），在本测试方法中，每分钟始OD 275 吸光值增加0.01的酵素量。
纳豆激酶酵素活性（FU/g）= （rAs - rAb）/0.01/0.1/60 *D
rAs：待测液之吸光值
rAb：空白组之吸光值
D：样品稀释倍数